Test ELISA detekuje četná onemocnění, a proto je široce používán v medicíně a dalších. Test ELISA je však nejznámější pro svou diagnózu lymské boreliózy. Co je test ELISA? Jak interpretovat výsledky? Jaká je cena testu?

Obsah:

  1. ELISA test – co detekuje? Použití ELISA
  2. ELISA test – co je to test?
  3. ELISA test a lymská borelióza – kdy provést?
  4. ELISA test - cena. Kolik stojí test ELISA?
  5. ELISA test – výsledky. Mohou být falešně pozitivní?
  6. ELISA test – výsledky. Mohou být falešně negativní?

ELISA test , tj. enzymová imunoanalýza, je běžně používaná laboratorní metoda, která slouží mj. pro kvantitativní detekci protilátek v krvi

Díky tomuELISA testnalezenaplikacev diagnostice bakteriálních onemocnění, jako jeLymeská nemoc s Lyme.

Výhodou metody ELISA je její jednoduchost, rychlé provedení a vysoká citlivost. Metoda ELISA se provádí pomocí speciálních plastových destiček s jamkami naplněnými např. boreliovými proteiny (antigeny) a specifickými monoklonálními protilátkami, které jsou určeny k detekci protilátek ve vzorku pacienta

ELISA test – co detekuje? Použití ELISA

Vysoká citlivost a jednoduchost metody ELISA ji učinily použitelnou v diagnostice mnoha nemocí, ale nejznámější je jako diagnostická metoda lymské boreliózy.

Při diagnostice lymské boreliózy, tzv nepřímá ELISA, která umožňuje detekovat specifické IgM nebo IgG v testovaném materiálu. Stejným způsobem lze pro diagnostické účely detekovat protilátky:

  • virové infekce: herpes viry (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, viry hepatitidy (HBV a HCV)
  • protozoální infekce: toxoplazmóza, giardiáza
  • autoimunitní onemocnění: celiakie (anti-tTG nebo anti-DPG protilátky), Hashimotova choroba (anti-TG a anti-TPO protilátky), zánětlivá onemocnění střev (anti-ASCA a anti-ANCA protilátky)
  • parazitární onemocnění a alergie,ve kterých jsou detekovány specifické IgE protilátky. Jejich zvýšená hladina může naznačovat přítomnost alergií, např. na pyl a potraviny, nebo parazitární invaze (tasemnice ozbrojená, lidská škrkavka)

Existují také úpravy metody ELISA (tzv. sandwich ELISA), které umožňují detekci testovaného vzorku i jiných proteinů než protilátek. Pak je cílem výzkumu detekovat v biologickém materiálu:

  • fragmenty virů nebo bakterií, nejčastěji se jedná o antigeny specifické pro daný patogen
  • sérové ​​hormony, např. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
  • enzymy, např. kalprotektin, pankreatická elastáza, alkalická fosfatáza
  • nádorové markery, např. CA-125
  • přítomnost drog v séru

Tato metoda se také používá v potravinářském průmyslu, kde lze detekovat stopová množství alergenů (např. mléko, arašídy), GMO nebo toxinů v potravinách.

ELISA test – co je to za test?

Diagnostika např. lymské boreliózy metodou ELISA spočívá v průkazu imunitních proteinů v biologickém materiálu - protilátek, které vznikají při odpovědi proti boreliovým antigenům

Protilátky jsou testovány ve dvou třídách, IgM a IgG. IgM jsou první protilátky, které se objevují v těle při kontaktu s bakteriemi a časem klesají.

Jejich místo zastupují perzistentnější protilátky IgG, které mohou v těle zůstat několik desítek let.

Tímto způsobem je nepřímo testována přítomnost bakterií v těle detekcí protilátek specificky namířených proti spirochetám Borrelia.

Protilátky v různých stádiích infekce mohou být namířeny proti řadě proteinů Borrelia. Například v rané fázi je to protein p41.

V pozdějších fázích se začíná objevovat stále více proteinů, jako je p21, p30, p39, p43. To je důvod, proč je diagnóza lymské boreliózy extrémně obtížná.

Výběr bakteriálních proteinů je extrémně důležitý, aby měl test vysokou diagnostickou hodnotu. Proto by se při diagnostice lymské boreliózy měly běžně používat testy ELISA II. nebo III.

ELISA test a lymská borelióza. Kdy vystoupit?

Lymeská borelióza je bakteriální onemocnění způsobené bakterií Borrelia burgdorferi a jejími mnoha odrůdami.

Diagnostika onemocnění není snadná kvůli složitosti imunitní odpovědi proti boreliím a nedokonalosti laboratorních metod

Nejpoužívanější laboratorní metodou je vysoce citlivá metoda ELISA, která detekuje specifické protilátky proti bakteriálním proteinům

V diagnostice lymské boreliózy se používá nepřímá metoda ELISA, ve které se rozlišují tato stádia:

  • inkubace jamek na destičce s materiálem odebraným od pacienta, např. sérem. Pokud jsou v testovaném materiálu protilátky proti boreliím, navážou se na proteiny na dně reakční jamky
  • poté se přebytečné sérum vypláchne speciální mycí tekutinou (pufrem) a provede se tzv. konjugát, tj. protilátka spojená s enzymem, který se váže na dříve navázané protilátky v reakčních jamkách
  • Substrát pro konjugát je přidán později a nedochází k žádné (pozitivní) nebo žádné barevné reakci (negativní)
  • posledním krokem je odečtení koncentrace protilátek proti boreliím v séru pacienta čtečkou (spektrofotometrem)

Metoda ELISA pro lymskou boreliózu se provádí z krve a v případě neurologických příznaků (neuroborelióza) i z mozkomíšního moku

Synoviální tekutina by neměla být testována, protože existuje vysoká pravděpodobnost falešně pozitivních výsledků.

Základem diagnózy onemocnění jsou klinické příznaky, které na ni poukazují, potvrzené výsledky laboratorních testů

Přidání výsledku laboratorního testu bez přítomnosti příznaků neopravňuje k diagnóze lymské boreliózy, protože bylo prokázáno, že protilátky proti spirochetám Borrelia jsou detekovány i u zdravých lidí

Sérologická diagnóza lymské boreliózy začíná semikvantitativním screeningovým testem ELISA. Pokud je výsledek negativní, znamená to, že nebyly detekovány žádné spirochety Borrelia nebo je výsledek falešně negativní.

Pokud je výsledek pozitivní nebo slabě pozitivní (nejednoznačný), konfirmační test Western blot, který je vysoce specifický.

Toto slouží k potvrzení „pravdivosti“ výsledků získaných metodou ELISA. Během diagnostiky nemůžete přeskočit žádný z výše uvedených kroků a například provést diagnostiku metodou Western blot nebo provést diagnózu pouze na základě pozitivního výsledku metodou ELISA

V Polsku diagnóza lymské boreliózy velmi často končí v první fázi screeningu, což vede k nesprávné interpretaci pozitivních nebo slabě pozitivních výsledků

Stojí za to vědět

ELISA test - cena. Kolik stojí test ELISA?

Test stojí kolem 60zlotých a dělá se hned. Na výsledky doporučení si však můžete počkat asi tři měsíce.

ELISA test – výsledky. Mohou být falešně pozitivní?

Falešně pozitivní výsledky jsou výsledkem zkřížené reaktivity IgM protilátek s jinými proteiny. Protilátky produkované tělem mohou „nesprávně“ rozpoznat antigen jiných mikroorganismů jako antigen Borrelia.

Nejčastější "chyby" se vyskytují u lidí infikovaných treponema pallidum, herpetickými viry au lidí se systémovým lupus erythematodes a dalšími revmatickými chorobami.

ELISA test – výsledky. Mohou být falešně negativní?

Falešně negativní výsledky se mohou objevit v časném stadiu infekce, poté by se měl test opakovat po 3-4 týdnech. Tomu se říká sérologické okno, tj. počáteční období infekce, ve kterém tělo ještě „nestihlo“ vytvořit specifické protilátky.

Podobně u imunokompromitovaných lidí, kteří nevytvářejí dostatek protilátek.

Velkým problémem, zejména u velmi intenzivních infekcí, je výskyt tzv imunitní komplexy, které se skládají z antigenů Borrelia spirochetes a specifických protilátek pro ně.

Díky tomu jsou protilátky "neviditelné" pro běžně používané metody, jako je ELISA, a přestože jsou přítomny v testovaném materiálu, nelze je detekovat.

V takových případech může laboratoř využít odbourávání imunitních komplexů. Tato léčba je navržena tak, aby uvolňovala protilátky. Tato metoda však není široce používána kvůli nedostatku standardizace v laboratořích.

Stojí za to vědět

Proč není diagnóza lymské boreliózy snadná?

Je to způsobeno složitostí imunitní odpovědi proti boreliím a omezeními laboratorních metod. Rozmanitost odrůd a vznik nových infekcí způsobujících infekce, zejména na evropském kontinentu, neusnadňuje vývoj účinných diagnostických metod.

V poslední době se v Evropě objevily další odrůdy, jako je Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana a Borrelia spielmanii. Navíc se v těle mohou boreliové spirochety proměnit v cysty nebo se zdržovat na místech těla, která jsou pro buňky imunitního systému nedostupná.

Být tak "neviditelný" pro imunitní systém. Navíc se ukázalo, že tkáně mohou obsahovat fragmenty bakterií, které mají silně prozánětlivé vlastnosti. Předpokládá se, že jsou zodpovědní za chronické příznaky lymské boreliózy, a to i přes negativní výsledky studielaboratoř.

Reference

1. Witecka-Knysz E. et al. Lymeská borelióza: proč je diagnostika tak obtížná? Laboratorní diagnostik duben 2007.2. Moore A. et al. Aktuální pokyny, běžné klinické úskalí a budoucí pokyny pro laboratorní diagnostiku lymské boreliózy, Spojené státy americké. Emerg Infect Dis. července 2016, 22. (7) .3. Laboratorní diagnostika nemocí přenášených klíšťaty Doporučení pracovní skupiny: Národní komora laboratorních diagnostiků, Státní zdravotní ústav-Národní hygienický ústav, Národní konzultant v oboru infekčních nemocí, Klinika infekčních nemocí a neuroinfekcí, Lékařská fakulta Białystok, Polish Society of Virology, Varšava 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) od A do Z. Springer 2022.

O autoroviKarolina Karabin, MD, PhD, molekulární bioložka, laboratorní diagnostika, Cambridge Diagnostics PolskaProfesí biolog se specializací na mikrobiologii a laboratorní diagnostik s více než 10letou praxí v laboratorních pracích. Absolvent Vysoké školy molekulární medicíny a člen Polské společnosti humánní genetiky Vedoucí výzkumných grantů v Laboratoři molekulární diagnostiky na Klinice hematologie, onkologie a vnitřních nemocí Lékařské univerzity ve Varšavě. Titul doktora lékařských věd v oboru lékařská biologie obhájila na 1. lékařské fakultě Lékařské univerzity ve Varšavě. Autor mnoha vědeckých a populárně vědeckých prací z oblasti laboratorní diagnostiky, molekulární biologie a výživy. Denně jako specialista v oblasti laboratorní diagnostiky vede obsahové oddělení v Cambridge Diagnostics Polska a spolupracuje s týmem nutričních specialistů CD Dietary Clinic. Své praktické poznatky z diagnostiky a dietoterapie nemocí sdílí s odborníky na konferencích, školeních, v časopisech a na webových stránkách. Zajímá se zejména o vliv moderního životního stylu na molekulární procesy v těle.

Kategorie:

Výzkum